Тест-системыдля серодиагностики возвратного тифа и болезни лайма методом непрямой иф

      Комментарии к записи Тест-системыдля серодиагностики возвратного тифа и болезни лайма методом непрямой иф отключены

Тест-системыдля диагностики эрлихиозов методом ДНК-зондов.

Флюоресцирующие антителадля диагностики эрлихиозов методом ИФ.

Тест-системыдля серодиагностики эрлихиозов методом ИФА.

Тест-системыдля серодиагностики эрлихиозов методом непрямой ИФ.

Антибиотики:пенициллины, тетрациклины, хлорамфеникол, фторхинолоны, макролиды и др.

Глава 18

ВОЗБУДИТЕЛИ РЕСПИРАТОРНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Возбудители респираторных вирусных инфекций относятся к различным семействам ДНК- и РНК-содержащих вирусов (табл. 18.1). Они объединены в одну группу на основании способности проникать в организм преимущественно через слизистую оболочку верхних дыхательных путей и вызывать поражения различных отделов респираторного тракта — острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ): риниты, фарингиты, ларингиты, трахеиты, бронхиты, а также пневмонии. Генерализованная инфекция с выраженной вирусемией наблюдается лишь при тяжелых формах заболевания, возникающих на фоне иммунодефицитов различной природы (врожденные иммунодефициты, тяжелые сопутствующие заболевания, СПИД и др.), а также в младенческом и старческом возрасте на фоне физиологического иммунодефицита.

Таблица 18.1. Вирусы-возбудители респираторных инфекций

Название вируса

Вызываемые заболевания

вирус гриппа типа В вирус гриппа типа С

СЕМЕЙСТВО Paramyxoviridae Вирусы парагриппа, респираторно-синцитиальный вирус (РСВ)

СЕМЕЙСТВО Coronaviridae коронавирусы человека

СЕМЕЙСТВО Picomaviridae РОД Rhinovirus риновирусы человека РОД Enterovirus

вирусы Коксаки — серотипы А-10, А-21, А-24, В-3, В-4, В-5 и др. вирусы ECHO — серотипы 4, 9, 11, 20, 25 и др.

СЕМЕЙСТВО Reoviridae реовирусы человека

Продолжение

Вызываемые заболевания

Грипп (эпидемии, пандемии, спорадические заболевания) Грипп (спорадические заболевания, эпидемии)

ОРВИ Пневмония

ОРВИ

ОРВИ (ринит)

ОРВИ и др. (см. также главу 19)

ОРВИ и др. (см. также главу 19)

ОРВИ, пневмония

ДНК-вирусы

СЕМЕЙСТВО Adenoviridae

аденовирусы серотипов 1—39 ОРВИ, пневмония, отит, конъ-

юнктивит; гепатит и другие системные инфекции при им-мунодефицитах

СЕМЕЙСТВО Herpesviridae

ПОДСЕМЕЙСТВО Alphaherpesvirinae Фарингит, тонзиллит, трахео-

вирус простого герпеса 1-го типа бронхит; пневмония при имму-

(HSV-1) нодефицитах и др. (см. главу 21)

Тема 18.1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА РЕСПИРАТОРНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

^ План

А Программа

1. Биологические свойства возбудителей респираторных вирусных инфекций, их патогенность, экология, особенность инфекций и эпидемиология вызываемых заболеваний.

2. Микробиологическая диагностика.

3. Диагностические и лечебно-профилактические препараты.

^ Демонстрация

1. Иммунофлюоресцентный метод экспресс-диагностики гриппа и ОРВИ.

2. Риноцитоскопия при гриппе и аденовирусной инфекции.

3. Диагностические и лечебно-профилактические препараты.

^ Задание студентам

1. Ознакомиться с бланками-направлениями на исследование в вирусологическую лабораторию.

2. Указать материал для исследования, необходимый для диагностики ОРВИ.

3. Оценить результаты реакции гемагглютинации с материалом зараженного куриного эмбриона (амниоти-ческой и аллантоисной жидкостью), поставленной с целью индикации вируса гриппа.

4. Учесть результаты идентификации выделенного вируса гриппа в РТГА. Сделать заключение.

5. Учесть результаты идентификации аденовирусов, выделенных в культуре клеток, в РСК.

6. Учесть результаты серодиагностики респираторных вирусных инфекций в РСК.

7. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилактическими препаратами. Указать механизм их действия.

^ Методические указания

• Микробиологическая диагностика гриппа и других респираторных вирусных инфекций

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из респираторного тракта, мазки и смывы со слизистой оболочки верхних дыхательных путей, промывные воды бронхов, мокрота.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Мазки, приготовленные из исследуемого материала, окрашивают по методу Романовского—Гимзы или другими методами и микроскопируют. В положительном случае наблюдаются признаки ЦПД вирусов. Поскольку большинство респираторных вирусов оказывают неспецифическое ЦПД (дегенерация и лизис зараженных клеток), метод является малоспецифичным и имеет ориентировочное значение.

Цитологическое (риноцитоскопическое) исследование применяют как ориентировочный экспресс-метод лабораторной диагностики гриппа. С поверхности нижней носовой раковины

берут мазки-отпечатки. Препараты окрашивают смесью основного фуксина и метиленового синего. В цитоплазме цилиндрического эпителия, а также в цитоплазме дегенерированных макрофагов и лейкоцитов располагаются широко контуриро-ванные включения, окрашенные в красный цвет. Данный метод позволяет дифференцировать грипп от аденовирусной инфекции, при которой наблюдаются деструкция клеток, вакуолизация ядер и образование внутриядерных включений.

Вирусологическое исследование. Исследуемый материал помещают в транспортную среду, содержащую антимикробные препараты широкого спектра действия для уничтожения сопутствующей бактериальной флоры. Затем материал центрифугируют. Для выделения чистой культуры производят заражение культур клеток надосадочной жидкостью. В зависимости от предполагаемого возбудителя используют разные типы клеточных культур: клетки человека (первичные культуры эмбриональных клеток, диплоидные линии фибробластов, перевиваемые клеточные линии HeLa, НЕр-2 и др.) или животных (первичные культуры клеток почки обезьян, линии мышиных фибробластов и др.). Культивирование респираторных вирусов может занимать от 2—3 до 20 сут и более в зависимости от природы возбудителя. Так, выделение аденовирусов занимает в среднем 6 сут, риновирусов — 4—5 сут, вируса гриппа — 3—4 сут, реовирусов — около 3 нед. Индикацию вирусов производят по ЦПД. Для индикации гемагглютинирующих вирусов (грипп, парагрипп) может быть использована реакция гем-адсорбции (см. тему 5.2), которая становится положительной еще до появления ЦПД. Идентификацию респираторных вирусов осуществляют по их антигенной структуре с помощью иммунологических методов [иммунофлюоресценция, РТГА, РСК, реакция нейтрализации (РН), ИФА и др.]. Эти же реакции используют для типирования выделенных вирусов. Применяют также биохимические (анализ фрагментов вирусных НК методом электрофореза) и молекулярно-биологические методы идентификации (ПЦР, метод нуклеиновых зондов).

Вирусологическое исследование не применяется для диагностики заболеваний, вызванных коронавирусами и РСВ, в связи со сложностью их культивирования.

В ряде случаев для выделения вируса гриппа используют куриные эмбрионы. Наличие вирусов гриппа в амниотической или аллантоисной жидкости устанавливают с помощью РГА (см. тему 5.2). Вирусы гриппа А хорошо агглютинируют эритроциты курицы, морской свинки, человека с группой крови 1(0), вирусы гриппа В — эритроциты курицы. Этот метод позволяет также установить титр вируса.

Идентификацию и типирование выделенной чистой культуры вируса гриппа осуществляют на основании антигенной структуры с помощью серологических реакций. Тип вируса

Тест-системыдля серодиагностики возвратного тифа и болезни лайма методом непрямой иф

(А, В или С) определяют в РСК. Подтипы вируса гриппа А по Н- и N-антигенам (H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 и др.) — в реакциях с набором типоспецифических сывороток к гемаг-глютинину и нейраминидазе (см. табл. 10.1.2 и 10.1.3). Идентификацию по Н-антигену проводят в РТГА, результаты реакции учитывают по отсутствию гемаготатинации. Для определения N-антигена применяют реакцию ингибиции нейрамини-дазы и реакцию иммунопреципитации в геле. Результаты РТГА (рис. 18.1.1; на вклейке), приведенные в табл. 10.1.3, свидетельствуют, что гемагглютинирующая активность исследуемого вируса нейтрализуется типоспецифической сывороткой N3H2 в разведениях 1:10—1:160 (до ее титра), т.е. исследуемый вирус относится к подтипу N3H2.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Метод ИФ является высокоспецифичным, универсальным в отношении разных возбудителей методом экспресс-диагностики (схема 18.1.1). Он позволяет обнаружить антигены вируса-возбудителя заболевания непосредственно в инфицированных клетках, присутствующих в исследуемом материале. Используют прямой и непрямой методы ИФ (см. тему 10.1). Из исследуемого материала готовят мазки на нескольких предметных стеклах. Носоглоточные смывы предварительно центрифугируют и из осадка, содержащего зараженные клетки, готовят мазки. Препараты обрабатывают различными флюоресцирующими антителами (против вирусов гриппа А, В, против вирусов парагриппа II и III типов, против РСВ, поливалентной противоаденовирусной сывороткой и др.) и изучают методом люминесцентной микроскопии. В положительном случае внутри клеток обнаруживают светящиеся вирусные включения и обращают внимание на их внутриклеточную локализацию. Так, при аденовирусной инфекции включения располагаются преимущественно в ядре зараженных клеток, при гриппе и парагриппе — в цитоплазме.

Присутствие вирусных антигенов в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Вирусные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Диагностика респираторных вирусных инфекций осуществляется методом парных сывороток. Кровь берут на 1-й и 3-й неделе от начала заболевания. Диагностическое значение имеет нарастание титра специфических противовирусных антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза. Серодиагностика при ОРВИ носит ретроспективный характер, поскольку накопление антител происходит в период реконва-лесценции — через 2—3 нед после начала заболевания. Метод

не позволяет своевременно установить диагноз, в связи с чем применяется преимущественно с целью ретроспективного подтверждения диагноза и для эпидемиологического анализа.

Для обнаружения антител используют различные серологические реакции: РСК, РТГА, РН, непрямой ИФ, ИФА и др. В крови больных в ходе заболевания появляются антитела к различным антигенам возбудителя, для выявления которых применяют разные серологические реакции. Так, антитела к антигенам нуклеопротеида вируса парагриппа выявляют в РСК, а к антигенам суперкапсида — в РТГА. Вирус-нейтрали-зующие антитела обычно появляются в период реконвалесцен-ции и могут длительно сохраняться после перенесенного заболевания. Для их обнаружения применяют РН.

Серодиагностика при риновирусных инфекциях не проводится в связи с большим числом серотипов (более 130) и отсутствием общих антигенов.

Серодиагностика гриппа. Наличие антител определяют с помощью РСК и РТГА со стандартными диагностикума-ми, представляющими собой наборы эталонных штаммов различных серотипов вируса гриппа (табл. 18.1.1).

Тест-системыдля серодиагностики возвратного тифа и болезни лайма методом непрямой иф

Таблица 18.1.1. Результаты РСК с парными сыворотками крови больного (1 и 2) при серодиагностике гриппа и других ОРВИ

Диагностикум Сыворотка № Разведения сыворотки Контроль сыворотки
1:10 1:20 1:40 1:80 1:160
Вирус гриппа А (H3N2) + +
Вирус гриппа В 1 2 + +
Аденовирус (поливалентный) 1 2 ++
РСВ +
+

РСК более чувствительна, чем РТГА, и позволяет выявить антитела к любому штамму одного и того же серотипа вируса. Диагностическое значение имеет четырехкратное увеличение титра антител в парных сыворотках (в период эпидемии гриппа) и двукратное нарастание в сыворотках крови больных при характерной клинической картине. Отсутствие нарастания титра антител не исключает гриппозной инфекции.

• Микробиологическая диагностика респираторных инфекций, вызванных герпесвирусами (см. главу 21)

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Тест-системы для выявления антигенов респираторных вирусов (гриппа, парагриппа, респираторно-синцитиального) методом ИФ.

Типоспецифические гриппозные сыворотки H0N1, H1N1, H2N2, H3N3, В и С. Применяют для серотипирования вирусов гриппа в РТГА и РСК.

Типоспецифические парагргагаозные сыворотки. Используют для идентификации и серотипирования вирусов парагриппа.

Типоспецифические аденовирусные сыворотки. Применяют для серотипирования аденовирусов в реакции нейтрализации.

Сухие типоспецифические диагностикумы (гриппозный и парагриппозный). Используют для серодиагностики соответствующих инфекций.

Аденовирусные диагностикумы. Применяют для серодиагностики аденовирусной инфекции.

Живая гриппозная вакцина. Готовят из аллантоисной жидкости куриных эмбрионов, зараженных вакцинными штаммами вируса гриппа основных серотипов. Применяют для профилактики гриппа (создание активного иммунитета). Вакцину вводят через нос или рот.

Убитая гриппозная вакцина. Инактивированные формалином цельные вирионы вакцинного штамма вируса гриппа, выращенного в культуре клеток. Вакцинный штамм получают ежегодно на основании данных эпидемиологического анализа с учетом предполагаемого направления антигенной изменчивости вируса. Применяют для профилактики гриппа (создание активного иммунитета).

Расщепленные гриппозные вакцины. Получают путем инактивации цельных вирионов вируса гриппа вакцинного штамма (см. выше) с последующим разрушением и очисткой компонентов. Вакцина содержит основные протективные антигены вируса гриппа — гемагглютинин, нейраминидазу, а также ряд дополнительных белков (Ml, NP). Применяют для создания активного иммунитета с целью профилактики гриппа.

Субъединичные гриппозные вакцины. Содержит основные протективные антигены вируса гриппа (гемагглютинин и нейраминидазу), полученные методом генной инженерии. Состав антигенов ежегодно обновляется с учетом предполагаемого направления антигенной изменчивости вируса.

Лечебно-профилактическая поливалентная гриппозная сыворотка. Получена путем гипериммунизации лошадей вирусами гриппа разных серотипов. Выпускают в сухом виде в смеси с антибиотиками и сульфаниламидами. Применяют интраназаль-но с целью экстренной профилактики гриппа и для лечения

больных в начале заболевания (создание пассивного иммунитета).

Противогриппозный донорский иммуноглобулин.Готовят из сыворотки крови доноров, иммунизированных живой гриппозной вакциной типов А и В. Применяют для экстренной профилактики и лечения гриппа в эпидемических очагах.

Иммуноглобулин нормальный человеческий.Получают путем фракционирования крови здоровых доноров. Неспецифический препарат, содержащий антитела различной специфичности. Применяют для профилактики ОРВИ (пассивный иммунитет).

Противовирусные препараты:

Интерферончеловеческий лейкоцитарный (получают из культуры лейкоцитов человека, обработанных интерфероногеном); интерферон рекомбинантный; неовир и другие индукторы интерферона. Применяют для профилактики и лечения гриппа и других вирусных респираторных заболеваний.

Ремантадин.Назначают для профилактики и лечения гриппа в первые дни заболевания.

Дополнительные материалы:

Клещевой боррелиоз (болезнь Лайма)


Похожие статьи: