Работа № 1. определение липопротеинов низкой плотности (лпнп) в сыворотке крови

      Комментарии к записи Работа № 1. определение липопротеинов низкой плотности (лпнп) в сыворотке крови отключены

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. ЛПНП (?-липопротеины) содержат в своем составе 40% холестерина, транспортируют этот стероид в сыворотке крови. Количество ЛПНП изменяется при нарушении метаболизма холестерина в организме.

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА. ЛПНП образуют с гепарином комплекс, который при добавлении хлорида кальция выпадает в осадок. Степень помутнения раствора пропорциональна содержанию ЛПНП в сыворотке крови и определяется нефелометрически.

ХОД РАБОТЫ: взять одну пробирку.

Работа № 1. определение липопротеинов низкой плотности (лпнп) в сыворотке крови ПРОБА отмерить ОПЫТ
Раствор СаСl2 0,27 %Сыворотка крови Гепарин, 1 % 2 мл0,2 млПеремешать.ФЭК, ? = 630 нм, кювета 5 мм, определить Е1 против Н2О.Перелить раствор в пробирку. 0,04 млПеремешать.Инкубация ровно 4 минутыОпределить в тех же условиях Е2 против Н2О.
РЕЗУЛЬТАТ: Е1 = ;Е2 = . РАСЧЕТ: концентрация ЛПНП = (Е2 – Е1)?100 = г/л.КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.Нормальное содержание ЛПНП в сыворотке крови: 2 — 4 г/л.Увеличение концентрации ЛПНП наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, гипотиреозе, механической желтухе, острых гепатитах, хронических заболеваниях печени, ожирении, гиперкортицизме, гиперлипопротеинемии II типа.

ВЫВОД:

Дата______________

ЗАНЯТИЕ № 27

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА

ПО ТЕМЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ ЛИПИДОВ»

Задания для самостоятельной работы:

1. Составить метаболическую карту липидного обмена.

2. На карте отметить:

2.1. Диагностически значимые субстраты (общие липиды, три-ацилглицеролы, холестерол, липопротеины, кетоновые тела).

2.2. Ферменты, исследуемые с целью диагностики (липаза, липопротеинлипаза).

2.3. Регуляторные ферменты ?-окисления, синтеза жирных

кислот и холестерола, липолиза.

2.4. Витаминзависимые ферменты.

3. Решение и обсуждение ситуационных задач.

Дата: _______________

ЗАНЯТИЕ № 29

РАБОТА № 26. АКТИВНОСТЬ АЛАНИНАМИНО-ТРАНСФЕРАЗЫ (АлАТ) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Аминотрансферазы — ферменты, катализирующие перенос аминогруппы с аминокислот на кетокислоты. В качестве кофермента ферменты содержат производное витамина В6 — пиридоксальфосфат и пиридоксаминфосфат. Активность аминотрансфераз отражает состояние аминокислотного обмена в печени, сердечной мышце, почках, скелетной мускулатуре и других органах.

ПРИНЦИП МЕТОДА: аланинаминотрансфераза катализирует реакцию:

АлАТВ6
глутаминовая кислота

Работа № 1. определение липопротеинов низкой плотности (лпнп) в сыворотке крови Работа № 1. определение липопротеинов низкой плотности (лпнп) в сыворотке крови аланин + 2-кетоглутаровая + пировиноградная

кислота кислота

При добавлении кислого 2,4-динитрофенилгидразина ферментативный процесс останавливается и образуется динитрофенилгидразон пирувата:

Работа № 1. определение липопротеинов низкой плотности (лпнп) в сыворотке крови

Это соединение в щелочной среде дает коричнево-красное окрашивание. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоты. По количеству пировиноградной кислоты судят об активности фермента (метод Райтмана-Френкеля).

ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки.

Работа № 1. определение липопротеинов низкой плотности (лпнп) в сыворотке крови ПРОБАотмерить О П Ы Т КОНТРОЛЬ
СУБСТРАТФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ РАСТВОРСЫВОРОТКА КРОВИ 0,25 мл— 0,05 мл 0,25 мл0,05 мл—
Инкубируют в термостате 30 минут при 37оС
2,4-Динитрофенилгидразин 0,25 мл 0,25 мл

Перемешать, оставить на 20 минут при комнатной температуре.

NaOH 2,5 мл 2,5 мл

Перемешать и через 10 минут измерить экстинкцию опыта на колориметре против контрольного раствора.

Длина волны 500-530 нм; кювета 5 мм.

РЕЗУЛЬТАТ: D Е = ;

По калибровочному графику активность аланинаминотрансферазы составляет ………….. ммоль/ч?л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Активность аланинаминотрансферазы в сыворотке крови у взрослых в норме: 0,1 — 0,68 ммоль/ч?л, у новорожденных 0,06 – 0,27 ммоль/ч?л, у детей 2-14 лет 0,09 – 0,64 ммоль/ч?л.

Повышение активности фермента наблюдается при некрозе клеток печени любой этиологии, вирусных и хронических гепатитах, механической желтухе, травмах мышц, миозите, миокардите, инфаркте миокарда, дистрофии, миопатии.

ВЫВОД:

Дата: _______________

ЗАНЯТИЕ № 30

Дополнительные материалы:

Высокие показатели холестерина в крови: причины и методы лечения


Похожие статьи: