Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

      Комментарии к записи Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции отключены

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жидкость, кровь, мазки со слизистой оболочки верхних отделов носоглотки, аспират из высыпных элементов.

При обследовании на носительство материал из верхних отделов носоглотки берут специальным носоглоточным тампоном (который на 3/4 Длины сгибают под углом 45°). При доставке в лабораторию его предохраняют от охлаждения и высушивания, поскольку менингококк очень чувствителен к воздействию этих факторов.

Спинномозговую жидкость берут в количестве 2—5 мл и делят на две части: одну центрифугируют и исследуют осадок, к другой добавляют полужидкую питательную среду и выдерживают при 37 С для накопления бактерий. Из исследуемого материала готовят мазки и производят посевы.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование(схема 14.2.1). Мазки из осадка спинномозговой жидкости окрашивают по методу Гра-ма и микроскопируют. При наличии гноя в большинстве случаев обнаруживаются типичные грамотрицательные диплококки, имеющие характерное расположение внутри лейкоцитов, что позволяет сделать окончательное заключение оменингококковой инфекции. При микроскопии мазков из носоглотки бактерионосителей наряду с менингококком обнаруживаются грамположительные стафилококки и стрептококки, атакже непатогенные нейссерии (Moraxella spp. и др.). Дифференцировать их по морфологическим признакам не представляется возможным.

Бактериологическое исследование.Исследуемый материал засевают петлей на чашки с питательным агаром, содержащим кровь, сыворотку крови или асцитическую жидкость. В среды добавляют антибиотик ристомицин (150 ЕД/мл), который задерживает размножение грамположительных кокков, содержащихся в исследуемом материале, и тем самым способствует выделению чистой культуры менингококка. Образование колоний менингококка на этих средах наблюдается через 48 ч после инкубации посевов при 37 С в атмосфере с повышенным содержанием С02 (3—10 %) и высокой влажностью. В отличие от других кокков колонии менингококка величиной с булавочную головку прозрачны, имеют голубоватый оттенок и ровные края. Такие колонии пересевают в пробирку со скошенным агаром для получения чистой культуры.

Идентификацию чистой культуры, дифференциацию от сапрофитных нейссерии, обитающих в носоглотке, проводят по ряду культуральных и биохимических признаков. Так, менингококк растет только вприсутствии нативного белка, вто время как другие нейссерии размножаются на простых средах и образуют пигмент; на средах Гисса с добавлением сыворотки крови менингококк ферментирует глюкозу и мальтозу до кислоты (табл. 14.2.1).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Для выявления антигенов менингококков в мазках из исследуемого материала используют метод ИФ.

Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Таблица 14.2.1. Дифференциальные признаки некоторых видовNeisseria иMoraxella catarrhalis

N.gonor-rhoeae
M. catarrhalis
N.meningitidis
N.sub-flava
N.mu-cosa

Признак

+ + + + +
+ + + + +
± ± + + +
± ± + + +
+ + + + +

Продукция каталазы

Продукция оксидазы

Образование пигмента

Рост при 22 °С

Потребность для роста в сыворотке или крови

Образование кислоты при расщеплении углеводов:

+ + + + ±
+ ± ± [+] ±
+ ± + ± ±
± ± + ± ±
± ± + + ±

глюкозы лактозы мальтозы сахарозы

Восстановление нитратов

Условные обозначения: (+) — 85—100 % штаммов положительны; (±) — 16—84 % штаммов положительны; [+] — положительная замедленная реакция.

Для обнаружения в спинномозговой жидкости специфического полисахаридного менингококкового антигена применяют метод встречного иммуноэлектрофореза: в агаровых пластинках на стекле размером 9×12 см вырезают два параллельных ряда лунок диаметром около 3 мм. В лунки одного ряда вносят исследуемую жидкость, в лунки другого ряда — преципитирую-щие антименингококковые сыворотки разных серогрупп. Для реакции используют веронал-мединаловый буфер. Пластинки помещают в аппарат для иммуноэлектрофореза на 40—45 мин при комнатной температуре и силе тока около 30 А. При положительном результате между лунками со спинномозговой жидкостью и соответствующей антисывороткой образуются 1— 2 полосы преципитации.

Антигены возбудителя также могут быть обнаружены в материале от больного в реакциях непрямой латекс-агглютинации, РИГА и др.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика.Для ретроспективного подтверждения диагноза используют РИГА с парными сыворотками.

Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции
Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Дополнительные материалы:

Левина Лидия Дмитриевна — менингококковая инфекция (2001)


Похожие статьи: