Методы рекомбинантной днк.

      Комментарии к записи Методы рекомбинантной днк. отключены

• клонирования ДНК (изоляция фрагментов молекулы, включение их в вектор

(плазмиды бактерий) для получения большого числа копий ДНК);

Методы рекомбинантной днк. Методы рекомбинантной днк. гибридизации: линейные отрезки двухцепочечной ДНК лейкоцитов распадаются

на одноцепочечные фрагменты при действии рестриктаз. Фрагменты разделяют электрофо- резом и переносят в среду с радиоактивным зондом (последовательность нуклеотидов одно- цепочечной ДНК, соответствующая патологическому гену). Если среди фрагментов ДНК имеется комплементарная зонду последовательность нуклеотидов, то происходит образова- ние двухцепочечной ДНК (определяется при помощи рентгеночувствительной пленки). Ме- тод позволяет обнаружить патологический ген в геноме.

IV. Методы экспресс-диагностики (“скрининг тесты”, просеивающие программы) —

методы предварительной диагностики наследственных заболеваний.

Дерматоглифический анализ — изучение гребешковой кожи.

Применяется в генетике для диагностики врожденной компоненты наследственных заболеваний (при геномной патологии отмечаются радиальные пет- ли на 4 и 5 пальцах, ЧПБ, главный ладонный угол от 600 до 800 и др.) и для установления зиготности близне- цов.

Химические методы(качественные цветные реакции). Для диагностики фенилкетону-

рии к мокрым пеленкам ребенка прикладывают бумагу, смоченную 10% раствором FeCl наличие в моче ФПК — зеленоватое окрашивание).

3 (при

Микробиологические тесты — основаны на свойствах бактерий требовать для роста

определенные химические вещества.

Тест Гатри: кровь новорожденных, наносят на диски фильтровальной бумаги и по- мещают на агаровую среду, в которой есть определенный штамм бактерий. Если концентра- ция ФА велика (фенилкетонурия), то отмечается бурный рост бактерий.

Определение Х- и Y- полового хроматина — исследуют клетки буккального эпителия или

лейкоциты. Х-хроматин определяется при окрашивании ацеторсеином, а Y-хроматин — акрихини- притом. Устанавливают генетический пол, диагностируют хромосомные болезни пола.

V. Методы пренатальной диагностики (диагностика наследственных дефектов

плода на ранних стадиях беременности).

1. Методы рекомбинантной днк. Непрямые методы (объект исследования — женщина): акушерско-гинекологическое,

медико-генетическое, серологическое обследование и определение эмбрионспецифичных бел- ков (объект исследования — женщина) показаны всем беременным женщинам.

Анализ содержания эмбрионспецифических белков в сыворотке крови матери ( a-

фетопротеин, хориональный гонадотропин, свободный эстрадиол продуцируются клетками плода и плаценты и поступают в кровь матери).

Проводится на 13-15 неделях беременности.

Уровень a-фетопротеина повышен :

а) при угрожающем выкидыше;

б) при внутриутробной гибели плода;

в) при Rh- несовместимости матери и плода;

г) при многоплодной беременности;

е) при дефектах нервной трубки;

ж) при врожденном нефрозе;

Низкий уровень a-фетопротеина отмечается при синдроме Дауна.

Прямые методы (объект исследования – плод):

1.Прямые неинвазивные методы показаны всем беременным женщинам, так как

считаются безопасным для матери и плода.

Ультрасонография (УЗИ) — использование ультразвука для получения изображения

плода и его оболочек на экране монитора. Метод применяется на 12-15 неделях беременно- сти, когда сформированы все системы органов плода и позволяет выявить многоплодную бе- ременность, крупные пороки плода (гидроцефалию, микроцефалию, анэнцефалию, аплазию конечностей, атрезию желудочно-кишечного тракта и т. д.).

2. Прямые инвазивные методы используются по показаниям:

ѓ женщина старше 35 лет (риск синдрома Дауна к 35 годам 1: 400, к 44 годам — 1:40);

ѓ структурные перестройки хромосом у одного из родителей;

ѓ 1-й ребенок имеет болезнь с рецессивным типом наследования;

ѓ наличие у родителей заболевания с доминантным типом наследования;

ѓ при сцепленном с Х-хромосомой наследовании, если плод — мальчик;

ѓ беременность на фоне психологических травм, тяжелых заболеваний.

Амниоцентез(взятие 20-30 мл амниотической

жидкости с находящимися в ней клетками плода).

1. Традиционный амниоцентез (15-17 недели

беременности).

2. Ранний амниоцентез (12-13 недели беремен-

ности).

Проводят трансабдоминально под контролем ультрасонографии. Жидкость используют для биохи-

мических (генные мутации), а клетки плода — для цитогенетических исследований (хромосомные и геномные мутации). Осложнения: в 0,5-1,4% случаев возможен выкидыш.

Хорионбиопсия(взятие эпителия ворсинок хориона) — проводится под контролем УЗИ на 8-12

неделях беременности. Есть трансабдоминальный и трансцервикальный методы. Катетером с пласти- ческой канюлей, соединенной со шприцом, извлекают 10-25 мг ворсинок хориона и используют их для цитогенетических, биохимических исследований и анализа ДНК. Метод позволяет диагностиро- вать различные мутации в ранние сроки беременности. В 3-6% случаев возможен выкидыш.

Фетоскопия (амниоскопия) проводится на 18-22 неделях беременности фиброоптическим

эндоскопом, вводимым под местным обезболиванием в полость амниона через брюшную стенку матки. Метод позволяет осмотреть плод, плаценту, пуповину и взять кровь плода из пуповины для ди- агностики наследственных болезней крови. Недостаток метода — узкое поле зрения (ограничивает ви- зуальную диагностику патологии плода). В 5-10% возможен выкидыш.

В РБ прямые инвазивные методы проводятся в Минске, Гомеле и Могилеве. Ежегодно выполняется около 4000 исследований.

Дополнительные материалы:

Схема клонирования ДНК


Похожие статьи: