Количественный анализ в уф и ви спектроскопии

      Комментарии к записи Количественный анализ в уф и ви спектроскопии отключены

Количественный анализ в спектрофотометрической практике основан на использовании закона Ламберта-Бера:

Количественный анализ в уф и ви спектроскопии
где I0 – интенсивность падающего света (квант с-1);

I – интенсивность света, прошедшего через раствор или пленку образца; D – поглощение раствора (безразмерная величина) или оптическая плотность или экстинкция, e — коэффициент молярной экстинкции, отнесенной к единице толщины поглощающего слоя (1 см) и единице концентрации исследуемого раствора С=1 моль/л; l-толщина поглощающего слоя.

Количественный анализ в уф и ви спектроскопии

Из уравнения :

Коэффициент экстинкции e является постоянной величиной для данного соединения при данной длине волны. При больших значениях e удобно пользоваться его логарифмом lg e.

Между поглощением (D) и пропусканием (Т) существует следующая зависимость:

Количественный анализ в уф и ви спектроскопии

Современные двухлучевые спектрометры позволяют непосредственно записывать поглощение или пропускание. Спектры поглощения строятся так, что на ординате откладывается поглощение (D) (или lg e) или пропускание (T), а на оси абсцисс – длина волны l.

Количественный анализ в уф и ви спектроскопии
В спектрофотометрии также используются такие показатели, как:

Количественный анализ в уф и ви спектроскопии
Если известны коэффициенты молярной экстинкции (e), толщина кюветы (l), и поглощение (D), то концентрацию хромофорного вещества можно найти количественно, используя закон Ламберта-Бера.

В некоторых случаях, если концентрация велика, e становится функцией С и тогда можно сказать, что закон Бера нарушается. Это может быть результатом рассеяния света или структурных изменений (например, димеризации, агрегации или химических изменений) при высоких концентрациях (рис. 2)

Количественный анализ в уф и ви спектроскопии
Рис 2. Положительное и отрицательное отклонение от закона Бера и причины отклонений.а — спектральный сдвиг, связанный с возрастанием концентрации, часто в результате полимеризации. Отметим, что при длине волны l2 не наблюдается изменения молярного коэффициента погашения при изменении концентрации. Эта длина волны соответствует изобестической точке; б — кривая, показывающая отклонения от закона Бэра. При l1 отклонение положительное (1). при l3- отрицательное (2). В изобестической точке при l2 закон всегда соблюдается (3).

Дополнительные материалы:

Введение в спектрофотометрию


Похожие статьи:

  • Количественный анализ в спектроскопии биомолекул

    Практически измерение спектров поглощения сводится к оценке доли излучения, поглощённой в объёме определённой толщины для разных длин волн. В качестве…

  • Особенности абсорбционной спектроскопии для биологических макромолекул

    Параметры, измеряемые в абсорбционной спектроскопии. На рис. 4 показаны спектры, снятые в видимой и УФ-областях для двух биологических молекул [4]….

  • Количественное определение белка

    Биуретовый метод Количественное определение белка в биологических жидкостях является обязательным при постановке диагноза многих заболеваний. Существует…