Характеристика цитологических методов исследования

      Комментарии к записи Характеристика цитологических методов исследования отключены
Название Цель Принцип
Витальная микроскопия
Микроскопия фиксированных клеток
Цитофотометрия
Фракционное центрифугирование
Авторадиография
Культура клеток
Гибридизация соматических клеток
Электронная микроскопия

Работа № 2.Изучить устройство светового микроскопа.

I.Механическая система:–––––––II.Оптическая система:––III.Осветительная система:––

Характеристика цитологических методов исследования

Работа № 3. Правила работы со световыми оптическими приборами.

1) Микроскоп следует правой рукой брать за штатив, а левой – поддерживать основание.

2) Установите микроскоп. Тубусодеожатель должен быть обращен к вам, а зеркало – напротив света.

3) Поставьте объектив малого увеличения в рабочее положение, если действие выполнено правильно, то вы услышите легкий щелчок.

4) Запомните: изучение любого объекта начинается с малого увеличения.

5) Смотрите в окуляр и вращайте зеркало до тех пор, пока поле зрения не будет освещено ярко и равномерно.

6) Опустите объектив малого увеличения (х8) над столиком на высоту примерно 0,5см с помощью макрометрического винта (винт нужно вращать на себя).

7) Положите на предметный столик микропрепарат покровным стеклом вверх так, чтобы объект находился в центре отверстия предметного столика.

8) Смотрите на микроскоп сбоку и опускайте тубус с помощью винта на расстояние приблизительно 2 мм от объектива до препарата.

9) Смотрите в окуляр и медленно поднимайте тубус (вращайте винт на себя) до тех пор, пока не увидите четкого изображения объекта.

10) Перейдите к рассматриванию объекта при большом увеличении. Вращая револьвер, установите объектив большого увеличения (х40) над предметным столиком; дождитесь легкого щелчка; найдите фокус, вращая винтом. Запомните: большое увеличение позволяет видеть глубину объекта, поэтому резко видны то одни, то другие структуры. Фокусное расстояние при большом увеличении составляет приблизительно 1 мм.

11) По окончании работы приведите микроскоп в нерабочее состояние: объективы переведите в нейтральное положение (они не должны смотреть в отверстие в предметном столике); тубус опустите вниз до предела.

3.1. Записать виды объективов и общее разрешение.

УвеличениеОбъектива Окуляр(кратность увеличения) Объектив(кратность увеличения) Разрешающая возможность
Малое
Большое
Иммерсионное

3.2. Работа с постоянными препаратами.

Разобрать методику приготовления постоянных препаратов. Рассмотреть постоянные препараты биологических объектов (тотальные и срезы).

1) Рассмотреть постоянный препарат (например, препарат клеток печени аксолотля) с помощью микроскопа при ув. 7х8 и 7х40. Отработать навык перехода с микроскопии объекта при малом увеличении на микроскопию объекта при большом увеличении. Зарисовать, отметить все видимые элементы: ядро, границы между клетками, цитоплазму.

2) Иммерсионная микроскопия (ув.7х90) микропрепарата клеток печени аксолотля (демонстрация). Уяснить назначение и принцип иммерсионной микроскопии.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

для студентов 1 курса педиатрического факультета к занятию № 1.1.2. по теме: «Биология клетки. Эукариоты и прокариоты. Цитохимия»

Цель занятия: Рассмотреть строение прокариот и эукариот. Изучить органоиды животной и растительной клетки. Познакомиться с некоторыми основными цитохимическими реакциями.

В итоге занятия студент должен знать: Основные различия между прокариотичес-кой и эукариотической клеткой, животной и растительной клетками, строение и функции органоидов эукариотической клетки и способы их выявления цитохимическими методами.

В итоге занятия студент должен уметь:Самостоятельно получить изображение на малом и большом увеличении, идентифицировать ядро, границы клеток, окрашенные органоиды и клеточные включения.

Вопросы для самоподготовки:

1. Химический состав клетки.

2. Что такое органоиды?

3. Какие структуры лежат в основе строения органоидов клетки?

4. Классификация органоидов.

5. Особенности строения прокариотической клетки.

6. Как и в виде чего расположена наследственная информация прокариот?

7. Какие органоиды имеются у эукариот?

8. Функции ядра, ядрышек.

9.Сходства и различия в строении животной и растительной клетки.

Литература для подготовки:

Основная: Учебник по биологии. Под ред. В.Н. Ярыгина, 2008, 1 т, c.38-51.

Рекомендуемая:

1. Учебник по биологии. Под ред. В.Н. Ярыгина, 1984, с. 17-26

2. Учебник по биологии А.А. Слюсарева, с. 14-27.

Практическая работа:

Работа № 1. Строение прокариотических клеток на примере бактерий (таблица). Изучить по таблице особенности строения прокариот и записать в тетрадь эти особенности.

Работа № 2. Общий план строения эукариотических клеток растений и животных.

а) клетки растений

Рассмотреть при малом и большом увеличении препарат клеток пленки лука, отметить различия в строении про- и эукариот. Зарисоватьи отметить ядро, клеточную стенку, цитоплазму, вакуоли.

б) клетки животных

Рассмотреть постоянный препарат «срез печени аксолотля» при малом и большом увеличении, зарисовать, отметить все видимые элементы: ядро, границы между клетками, цитоплазму. Отметить в тетради различие в строении растительной и животной клетки.

Работа № 3. Изучение внутреннего строения эукариотической животной клетки.

Работа с электроннограммами. Рассмотреть строение плазматической мембраны, лизосом, ядра, митохондрий, комплекса Гольджи, эндоплазматической сети, клеточного центра, рибосом.

Работа № 4. Выявление ДНК в ядрах клетки по Фельгену.

Под иммерсионным увеличением микроскопа рассмотреть (демонстрация) микропрепараты клеток, окрашенные реактивом Шиффа, фуксин-сернистой кислотой по Фельгену. Зарисовать одну клетку. Отметить, что ДНК в ядре клеток окрашивается по Фельгену в сиренево-фиолетовый цвет. Обратить внимание на глыбчато-нитчатую структуру хроматина в ядрах клеток.

Работа № 5.Выявление РНК по Браше.

Рассмотреть при иммерсионном увеличении микроскопа (демонстрация) микропрепараты, окрашенные на РНК по Браше, полученные из печени крыс. Зарисовать одну клетку с реакцией на РНК. Указать, что РНК по Браше выявляется в виде гранул и глыбок и окрашивается пиронином в малиново-красный цвет. Одновременно метод Браше позволяет компонентам красителя – метиловым-зеленым окрашивать ДНК в зеленый цвет.

Работа № 6. Выявление гликогена.

Рассмотреть на большом увеличении микроскопа микропрепараты, окрашенные на гликоген Шик реакцией, полученные из печени крыс. Зарисоватьи указать, что гликоген окрашивается в темно-вишневый цвет реакцией с Шифф-йодной кислотой (смесь реактива Шиффа с йодной кислотой). ШИК-реакция и выявляется в виде гранул и глыбок, которые часто смещаются при фиксации ткани к одному из полюсов клетки.

Работа № 7. Выявление липидов в клетках.

Изучить на большом увеличении микроскопа микропрепараты, окрашенные на липиды осмиевой кислотой. Зарисовать одну клетку, указать, что нейтральные липиды выявляются в клетках при фиксации тканей осмиевой кислотой в виде мелких и крупных капель черного цвета.

Отметить, что липиды выявляются также веществами, растворимыми в них, например, судановыми красителями (судан черный, судан красный). Это органические красители, имеющие сложный состав.

Работа № 8. Выявление комплекса Гольджи.

Рассмотреть клетки, в которых комплекс Гольджи имеет черную окраску (импрегнация солями серебра или осмиевой кислотой). Он располагается обычно около ядра или вокруг клеточного центра, однако его локализация может изменяться в связи с функциональной активностью клетки. Зарисовать одну клетку и отметить локализацию комплекса Гольджи.

Работа № 9.Выявление митохондрий.

Рассмотреть под микроскопом митохондрии (окраска по Альтману). Они имеют вид красных гранул, палочек, колбочек. Зарисовать одну клетку с митохондриями.

Записать в тетради: Качественные реакции на различные компоненты клетки.

Выявляемые компоненты клетки Цитохимическая реакция Характер выявления
ДНК в ядрах Фельгена (реактив Шиффа – фуксин-сернистая кислота) сиренево-фиолетовые глыбки в ядре
РНК Браше (метиленовый зеленый – пиронин) малиново-красные гранулы в цитоплазме и окрашенные ядрышки
Гликоген Шик-реакция (Шифф-йодной кислотой) Темно-вишневые глыбки в цитоплазме
Липиды Осмиевая кислота Включения в виде капель черного цвета
Комплекс Гольджи Осмиевая кислота Черные гранулы, извитые нити
Митохондрии По Альтману (гематоксилин и кислый фуксин) Гранулы, палочки красного цвета
Клеточный центр Железный гематоксилин 2 черные центриоли и ахроматиновые нити

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

для студентов 1 курса педиатрического факультета к занятию № 1.1.3. по теме: «Организация генетического материала»

Цель занятия: Увидеть видоспецифичность кариотипов различных позвоночных и научиться идентифицировать хромосомы человека. Научиться анализировать кариотип человека, используя метод дифференциального окрашивания, по которому можно идентифицировать каждую хромосому.

В итоге занятия студент должен знать:Строение и принципы классификации хромосом. Понятие о кариотипе.

В итоге занятия студент должен уметь:Идентифицировать хромосомы по кариограммам и атласам, содержащим Парижскую номенклатуру хромосом.

Вопросы для самоподготовки:

1. Организация клеточного ядра. Роль ядра в обеспечении жизненных процессов в эукариотических клетках.

2. Особенности молекулярной структуры ДНК, особенности репликации ДНК.

3. Строение и функция хромосом. Правила хромосом.

4. Почему при микроскопии исследователь видит Х-образные хромосомы?

5. Чем отличаются гетеро- и эухроматиновые участки хромосом?

6. Принцип классификации хромосом. (Денверская и Парижская классификации, их отличия, преимущество Парижской классификации).

7. Кариотип – индивидуальный признак вида. Идиограмма.

Литература для подготовки:

Основная: Учебник по биологии. Под ред. В.Н. Ярыгина, 2008, 1 т, c. 117-148.

Рекомендуемая:

1. Учебник по биологии. Под ред. В.Н. Ярыгина, 1984, с. 35-47

2. Учебник по биологии А.А. Слюсарева, с. 27-33, с. 117-118.

Практическая работа:

Работа № 1.Хромосомный уровень организации наследственного материала.

1.1.Строение хромосом.

Пользуясь микропрепаратами и таблицами, рассмотреть строение хромосомы. Зарисовать и обозначить ее компоненты (центромера, плечи (короткое – p, длинное – q), хроматиду).

Характеристика цитологических методов исследования Характеристика цитологических методов исследования

1 –2 –3 –4 –

Характеристика цитологических методов исследования Характеристика цитологических методов исследования

1.2. Хромосомный набор человека.

Рассмотреть под иммерсионным увеличением метафазную пластину из культуры лейкоцитов крови человека, подсчитать общее число хромосом, отметить их тип. Зарисовать 3 типа хромосом: мета-, субмета-, акроцентрическую, обозначить плечи хромосом и центромеру.

Основные типы хромосом человека (зарисуйте и отметьте положение центромеры):

Характеристика цитологических методов исследования

Характеристика цитологических методов исследования

Характеристика цитологических методов исследования

1.3. Кариотипы различных животных и растений.

Рассмотреть фотографии с хромосомным набором макака-резус, крысы, лосося, мухи дрозофилы, определить число и структуру. Сделать записи об особенностях кариотипа в отличие от кариотипа человека.

Вывод:запишите вывод о видоспецифичности хромосом различных организмов.

Работа № 2. Идентификация хромосом человека согласно Денверской классификации.

Пользуясь раздаточным материалом – таблицами со стандартным кариотипом человека, измерить с помощью линейки короткое и общую длину хромосом кариотипа, принимая во внимание, что длина первой хромосомы равна 10 мкм, а рисунок кариотипа сделана таким образом, что первая пара хромосом равна 20 мм. Следовательно, для перевода длины хромосом в мкм необходимо полученные величины по измерению хромосом на фотографиях в мм уменьшить в 2 раза (2мм – 1мкм).

У хромосом высчитывается абсолютная длина – в мкм и центромерный индекс – отношение короткого плеча к длине всей хромосомы, выраженная в процентах. Затем с плаката или прилагаемой таблицы перевести все стандартные параметры всех хромосом человека. В конце работы следует отметить, что по данным параметрам (абсолютная длина и центромерный индекс) возможно идентифицировать все хромосомы кариотипа человека. Кроме того, в тетрадях необходимо записать таблицу, где следует отметить число крупных, средних и мелких акро-, субмета-, и метацентрических хромосом. Крупные 10-7,5 мкм, средние 7-4 мкм, мелкие 3,9-2 мкм.

АкроцентрическиеЦИ=19-30 СубметацентрическиеЦИ=31-39 МетацентрическиеЦИ=40-48
Крупные10-7,5мкм
Средние7-4мкм
Мелкие3,9-2мкм

Необходимо указать отличительные признаки набора мужских и женских хромосом.

ПАРАМЕТРЫ ХРОМОСОМ ЧЕЛОВЕКА

Группа хромосом A B C D Е F G X Y
1-3 4, 5 6-12 13-15 16-17 19, 20 21, 22
средн. ср. ср. ср. ср. ср. ср. ср. ср. ср.
Абсолютная длина в мкм
Длина короткого плеча (p)
Центромерный индекс (?)

Короткие плечи хромосом (р) 13,14,15 = 0,8 мкм; 21,22 = 0,6 мкм; Y = 0,5 мкм.

Работа № 3. Идентификация хромосом человека по Парижской системе классификаций.

Посмотреть метафазную пластинку дифференциально окрашенных хромосом человека (демонстрация). Проанализировать дифференциально окрашенный хромосомный набор человека на фотографии.

Зарисовать в тетради первую хромосому кариотипа человека, отметить гетеро- и эухроматиновые участки. Отметить и записать преимущества Парижской классификации перед Денверской классификацией.

Работа № 4. Политенные хромосомы.

Рассмотреть при большом увеличении микроскопа препарат слюнных желез личинок комаров и отметить их исчерченность. Зарисовать: на рисунке обозначить светлые зоны – эухроматиновые, интенсивно окрашенные зоны – гетерохроматиновые и пуфы-вздутия. Отметить и записать их функциональную значимость.

Вопросы к коллоквиуму

Дополнительные материалы:

Методы цитологии. Клеточная теория


Похожие статьи: