Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр

      Комментарии к записи Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр отключены

Тест-системыдля диагностики ВИЧ/СПИД методом ПЦР.

Тест-системыдля серодиагностики ВИЧ/СПИД методом ИФА.

Тест-системыдля диагностики папилломавирусной инфекции методом ПЦР.

Противовирусные препараты:

Ингибиторы обратной транскриптазы:азидотимидин (AZT), ди-дезоксиинозин (DDI), дидезоксицитидин (DDC), невирапин и др.

Ингибиторы протеазы:саквинавир, ритонавир, индинавир, нелфинавир и др.

Препараты для иммунотерапии:интерферон человеческий лейкоцитарный; интерферон рекомбинантный.

Глава 23

ВОЗБУДИТЕЛИ МИКОЗОВ

Заболевания, вызываемые грибами (myces), — микозы, чрезвычайно разнообразны как по биологическим особенностям их возбудителей, так и по патогенезу и клиническим проявлениям (табл. 23.1). Важную роль в развитии микозов играют иммунодефицитные состояния, изменения экологических факторов. Некоторые грибы рассматриваются как возбудители вторичных инфекций, например при ВИЧ/СПИД, а также имеют значение при развитии дисбактериоза.

Лабораторная диагностика микозов проводится в микологических лабораториях или в специализированных микологических центрах.

Таблица 23.1. Грибы — возбудители микозов человека

Микроорганизмы

Заболевания (локализация поражений)

Возбудители глубоких (системных) микозов

Histoplasma capsulation Гистоплазмоз

Coccidioides immitis Кокцидиомикоз

Blastomyces dermatitidis Бластомикоз (северо-американский)

Cryptococcus neoformans и др. Криптококкоз

Возбудители эпидермомикозов (дерматомикозов)

Trichophyton spp. Микоз гладкой кожи, стоп, паховой

области, волосистой части головы, ногтевых пластинок

Epidermophyton spp. Микоз паховой области, стоп, ногте-

вых пластинок

Microsporum spp. Микоз волосистой части головы и

гладкой кожи

Условно-патогенные грибы и вызываемые ими микозы

Candida spp. Кандидоз кожи и слизистых оболочек

полости рта, мочеполовой системы, дыхательной системы, кишечника и др.

Aspergillus spp. Аспергиллез дыхательной системы,

ушей и др.

Pneumocystis carinii и др.Пневмоцистоз дыхательной системы

(пневмония, развивающаяся на фоне иммунодефицита)

Тема 23.1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА МИКОЗОВ

^ План

^ Программа

1. Биологические свойства возбудителей кандидоза, дерматомикозов и глубоких микозов; их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.

2. Микробиологическая диагностика.

3. Диагностические, профилактические и лечебные препараты.

Демонстрация

1.Candida spp. — мазок из чистой культуры (окраска ген-циановым фиолетовым).

2. Candida spp. — нативный препарат раздавленная капля из чистой культуры.

3. Candida spp. в патологическом материале от больного (окраска по методу Грама).

4. Типы филаментации грибов рода Candida на картофельном агаре.

5. Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр Определение видовой принадлежности грибов рода Candida.

6. РСК и реакция агглютинации при диагностике висцерального кандидоза с парными сыворотками.

7. Морфология и культуральные свойства плесневых и других грибов (рост на плотных питательных средах).

8. Диагностические, профилактические и лечебные препараты.

Задание студентам

1.Указать материал для исследования.

2. Микроскопировать и зарисовать препараты дрожжеподобных грибов рода Candida, приготовленные из чистой культуры и патологического материала.

3. Определить видовую принадлежность грибов рода Candida на основании морфологии клеток и колоний, типа филаментации и биохимических свойств.

4. Оценить результаты РСК для серодиагностики висцерального кандидоза. Сделать заключение.

5. Дать краткую характеристику демонстрируемым диагностическим, профилактическим и лечебным препаратам.

Методические указания

• Микробиологическая диагностика кандидоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: налет со слизистых оболочек, кожные чешуйки из очага поражения, мокрота, моча, спинномозговая жидкость, кровь и др.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Микроскопическое исследование.При исследовании препаратов используют окраску простыми методами, а также по методам Романовского—Гимзы, Грама и др. Грибы рода Candida хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. При необходимости исследуют нативные препараты. В нативных и окрашенных препаратах видны одноклеточные микроорганизмы круглой или овальной формы.

Микологическое (культуральное) исследование.Делают посев исследуемого материала на агар Сабуро или другие специальные среды. Посевы инкубируют при 20 и 37 С. Рост колоний начинается на 2—3-й сутки, и окончательное формирование происходит через 5—6 дней. Идентификацию грибов рода Candida проводят на основании морфологии клеток, типа филаментации и биохимических свойств (табл. 23.1.1). Важное диагностическое значение имеют многократные количественные посевы исследуемого материала. Нарастающее количество колоний в посевах подтверждает диагноз.

Таблица 23.1.1. Таксономические признаки дрожжеподобных грибов родаCandida

Вид Морфология Культуральные свойства Биохимические свойства — ферментация Сахаров
колонии преобладающий тип филамента- глюкозы сахарозы мальтозы лактозы
ции

C.albicans Крупные, Круглые, Мусо- КГ — КГ

круглые, сметано- toruloi-

овальные образные, des края ровные

C.tropicalis Оваль- Круглые, Мусо- » КГ » ¦ —

ные, сметано- toruloi-

удлинен- образные, des

ные края ров-

ные или зубчатые C.krusei Удлинен- Круглые, Мусо- » — — • —

ные суховатые, toruloi-

неровные des края

Условные обозначения: КГ — образование кислоты и газа.

Во многих случаях возможна идентификация выделенной культуры с указанием только родовой принадлежности (Candida spp.).

Экспресс-методы диагностики. Иммунохимические исследования. Метод ИФ и другие серологические реакции применяют для обнаружения антигенов возбудителя в материале.

Серодиагностика.Для обнаружения антител используют реакции агглютинации, РСК и др. Серодиагностика имеет ограниченное применение: нарастание титра антител в сыворотке крови при висцеральном кандидозе подтверждает диагноз.

• Микробиологическая диагностика дерматомикозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ чешуйки кожи, волосы, соскоб ногтевых пластинок.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Микроскопическое исследование.Для приготовления препарата на предметное стекло наносят каплю 10 % раствора

Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр
Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр
Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр

Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр Рис.23.1.1. Дерматофиты в пораженном волосе.

а — Microsporum; б — Trichophyton; в — Achorion.

гидроксида натрия или спирта с глицерином, в которую помещают 2—3 подозрительных волоса, или несколько кожных чешуек. Препарат (со щелочью) осторожно подогревают над пламенем до появления белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли, не доводя ее до кипения. Затем каплю накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом с объективом 8х и 40х.

При оценке результатов микроскопического исследования и дифференциальной диагностике учитывают следующие признаки (рис. 23.1.1).

Microsporum canis идр. (микроспория) — волос в фолликулярной части окружен чехлом из мозаично расположенных мелких спор гриба. Внутри волоса обнаруживаются фрагменты гриба и споры.

Trichophyton tonsurans (стригущий лишай) — локализация элементов гриба в патологическом материале может быть различной. Споры гриба Trichophyton либо располагаются только внутри пораженного волоса, сплошь заполняя его содержимое (эндотрикс), либо несколькими слоями окружают волос снаружи в виде чехла (эктотрикс), либо споры и мицелий находятся как внутри, так и снаружи волоса (эндоэктотрикс).

Trichophyton (Achorion) schoenleinii (фавус или парша) — в волосе обнаруживают полиморфные грибковые элементы. Наряду с тонким мицелием встречается мицелий широкий, состоящий из прямоугольных клеток. Часто наблюдаются споры круглой или прямоугольной формы, а также пузырьки воздуха.

Epidermophyton floccosum (эпидермофития паховая) — элементы гриба содержатся в чешуйках кожи, где располагаются в виде толстых септированных ветвящихся нитей мицелия наряду со спорами многогранной формы.

Микологическое (культуральное) исследование.Проводят для установления родовой и видовой принадлежности возбудителя путем выделения чистой культуры гриба и изучения его биологических свойств. Материал предварительно обрабатывают кислотами или антибиотиками. Затем делают посев на сахарный питательный агар, сусло-агар, агар Сабуро, овощные среды (см. тему 4.1), куда добавляют антибиотики для задержки роста бактериальной флоры. Посевы инкубируют при 30 °С. В положительных случаях рост наблюдается на 3—5-е сутки в виде разнообразных колоний: гладких, морщинистых, мучнистых, пушистых, часто пигментированных. При микроскопии препаратов, приготовленных из культур, хорошо заметен развитой, широко ветвящийся септированный мицелий. Органами размножения служат споры, которые могут быть как внутренними (эндоспоры), расположенными внутри мицелия, так и наружными (экзоспоры), расположенными на концах или по сторонам нитей мицелия. Специальных органов плодоношения типа асков (сумок) у дерматофитов не обнаружено, что дало основание отнести их к несовершенным грибам — Fungi imper-fecti,

• Микробиологическая диагностика глубоких (системных) микозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мокрота, моча, пораженные ткани, биоптаты кожи и лимфатических узлов, спинномозговая жидкость и др.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Микроскопическое исследование.Обнаружение овальных дрожжевых или других тканевых форм грибов позволяет поставить предварительный диагноз. Иммунофлюоресцентный метод является наиболее эффективным способом выявления возбудителя в патологическом материале (см. ниже).

Микологическое исследование.Производят посев материала на среду Сабуро, кровяной агар и другие среды. Посевы инкубируют в течение нескольких недель при 37 и 20 С. Выделенные культуры идентифицируют на основании морфологических и

Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр Диагностические, профилактические и лечебные препараты. тест-системыдля диагностики вич/спид методом пцр биохимических признаков. Грибы, вызывающие глубокие микозы, относятся к группе возбудителей ООИ, представляющих биологическую опасность IV степени (см. главу 11). Необходимо помнить, что лабораторная диагностика этих инфекций осуществляется только в специализированных лабораториях.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. При криптококкозе определяют антиген в спинномозговой жидкости и в сыворотке крови (у больных ВИЧ/СПИД) в динамике заболевания.

Молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика.Проводят для определения антител, которые обнаруживаются в сыворотке крови через 2—4 нед после начала заболевания. Обычно используют РСК, РНГА, реакции иммунодиффузии, ИЭФ и др.

Кожно-аллергические пробы.Применяют для выявления состояния ГЗТ к соответствующим аллергенам.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Кандидозный антиген— взвесь 2-суточной агаровой культуры грибов рода Candida в изотоническом растворе хлорида натрия. Применяют для постановки реакции агглютинации для серодиагностики кандидоза.

Кандидозный антигендля РСК— спиртово-водный экстракт из культуры гриба рода Candida. Применяют для постановки РСК и кожно-аллергических проб при кандидозе.

Противогрибковые препараты:полиеновые антибиотики (нистатин, леворин, амфотерицин В), кетоконазол, флуконазол и другие производные имидазола, полиоксины, эхинокандины, 5-фторцитозин, гризеофульвин.

Дополнительные материалы:

Диагностика ВИЧ-инфекции


Похожие статьи: