Анализ дифференцировки мезенхимных стволовых клеток in vitro

      Комментарии к записи Анализ дифференцировки мезенхимных стволовых клеток in vitro отключены

Принцип анализа:

Стволовые клетки функционально определяются своей способностью к самовоспроизведению и генерации большого числа дифференцированных прогениторных клеток, которые в дальнейшем развиваются в специализированные клетки организма. Различные популяции стволовых клеток были выделены из разных тканей взрослого организма, например мезенхимные стволовые клетки (МСК) были выделены из костного мозга. МСК имеют способность дифференцироваться в адипоциты (клетки жировой ткани), хондроциты (клетки хрящевой ткани), остеоциты (клетки костной ткани), гепатоциты ( клетки паренхимы печени), кардиомиоциты (мышечные клетки сердца) и нейроны. Стволовые клетки способны к дифференциации при получении сигнала “извне”. Эти сигналы в любом организме возникают естественным путем, но могут быть созданы искусственно в лабораторных условиях. Известно, что специфическая дифференцировка стволовых клеток может быть индуцирована микроокружением специальных культуральных сред.

В процессе выделения и культивирования МСК их статус лучше всего устанавливается по их способности к дифференцировке в разные мезенхимные клеточные линии, – именно эта способность и определяется с помощью анализа дифференцировки. RD Systems’ Human Mesenchymal Stem Cell Functional Identification Kit (специальная тест система, созданная для проведения данного анализа in vitro) содержит специальные добавки в питательную среду, которые позволяют индуцировать дифференцировку МСК в адипо-, остео- и хондроциты, а также набор антител для определения фенотипов зрелых клеток.

Материалы, входящие в набор для анализа:

— адипогенная добавка в питательную среду

— остеогенная добавка в питательную среду

— хондрогенная добавка в питательную среду

— ITS добавка, содержащая инсулин, трансферрин, альбумин и линолевую кислоту

— лиофилизированные козлиные поликлональные антитела к белку FABP4 (белок-переносчик жирных кислот, специфичен для адипоцитов)

— лиофилизированные мышиные поликлональные антитела к остеокальцину (маркер формирования кости)

— лиофилизированные козлиные поликлональные антитела к аггрекану (протеогликан клеток хрящевой ткани)

Материалы:

-мезенхимные стволовые клетки человека

-24-луночные культуральные планшеты

— круглые покровные стекла (12 мм)

— 15 мл пробирки для центрифугирования

— микропипетки переменного объема

-хирургические щипцы

Реагенты:

-питательная среда ?MEM

— питательная среда D-MEM/F-12

— сыворотка плодов коров

— фосфатно-буферный раствор (ФБР)

— пенициллин

— стрептомицин

— глутамин

— 4% раствор параформальдегида в ФБР

— 1% раствор альбумина в ФБР

— раствор, содержащий 0,3 % TritonX-100, 1% альбумина, 10% сыворотки в ФБР

— гистологическая среда

-вторичное антитело, конъюгированное с флюорофором

-дистиллированная вода

Оборудование:

— термостат ( 37 ° C, 5% CO2)

— центрифуга

-флуоресцентный микроскоп

— водяная баня

— криостат

Схема анализа:

Анализ дифференцировки мезенхимных стволовых клеток in vitro

Состав питательных сред.

ОСНОВНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА СПЕЦИАЛЬНАЯ ДОБАВКА
Адипоциты ?MEM 90%Сыворотка плодов коровы 10%Пеннициллин + Стрептомицин + Глутамин гидрокортизонизобутилметилксантининдометацин
Остеоциты ?MEM 90%Сыворотка плодов коровы 10%Пеннициллин + Стрептомицин + Глутамин дексаметазонаскорбат-фосфатбета-глицеролфосфат
Хондроциты D-MEM/F-12 99%ITS добавка 1 %Пеннициллин + Стрептомицин + Глутамин дексаметазонаскорбат-фосфатпролинпируват

Дополнительные материалы:

Стволовые клетки (рассказывает Сергей Киселёв)


Похожие статьи:

  • Региональные стволовые клетки

    В течение жизни во взрослом организме постоянно происходит гибель клеток различных тканей, как при естественном обновлении (апоптоз), так и при…

  • Гемопоэтические стволовые клетки

    Гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) определяются по их способности давать все гемопоэтические линии in vivo и поддерживать образование этих клеток в…

  • Эмбриональные стволовые клетки

    Изучение эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) началось в 1963 году, первоначально с использованием дезагрегированных эмбрионов кроликов и мышей. Их…